兔子層連蛋白ELISA試劑盒

方法二　用于檢測(cè)未知抗體的間接法：用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。↓ 加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照） ↓ 于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。↓ 其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。編輯本段（三）試劑器材1.　試劑 （1）包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）: NaHCO3 1.59克 NaHCO3　2.93克 加蒸餾水至1000ml（2）洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O　2.9克 NaCl　8.0克 KCl　0.2克 Tween-20　0.05%　0.5ml 加蒸餾水至1000ml （3）稀釋液：牛血清白蛋白（BSA）0.1克 加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。（4）終止液（2M　H2SO4）：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。（5）底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）: 0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml 0.1M檸檬酸（19.2克/L）24.3ml 加蒸餾水50ml。（6）TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液: TMB（10mg/5ml無水乙醇）0.5ml 底物緩沖液（PH5.5）10ml 0.75%H2O2　32μl（7）ABTS使用液: ABTS　0.5mg 底物緩沖液（PH5.5）1ml 3%H2O2　2μl （8）抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。（9）正常人血清和陽(yáng)性對(duì)照血清。2.器材:（1）聚苯乙烯塑料板（簡(jiǎn)稱酶標(biāo)板）40孔或96孔，ELISA檢測(cè)儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。（2）小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。（3）4℃冰箱，37℃孵育箱。

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