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    產(chǎn)品中心您現(xiàn)在的位置:首頁(yè) > 產(chǎn)品展示 > 生化檢測(cè)試劑盒 > 輔酶Ⅱ系列 > NAD蘋(píng)果酸酶(NADME)測(cè)試盒

    NAD蘋(píng)果酸酶(NADME)測(cè)試盒

    簡(jiǎn)要描述:

    NAD蘋(píng)果酸酶(NADME)測(cè)試盒廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋(píng)果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),產(chǎn)生酸和CO2,以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng),是蘋(píng)果酸代謝的關(guān)鍵酶。

    更新時(shí)間:2024-09-02;廠商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商;覽量:2498

    商品詳情:
    NAD蘋(píng)果酸酶(NADME)測(cè)試盒測(cè)定意義:

    ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋(píng)果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),產(chǎn)生酸和CO2,以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng),是蘋(píng)果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來(lái)植物ME活性測(cè)定較多,已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對(duì)底物特異性的不同,可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

    貨號(hào)

    規(guī)格

    檢測(cè)方法

    YSH3231

    100管/96樣

    微量法

    YSH3231-1

    50管/48樣

    紫外分光光度法

    測(cè)定原理:

    NADP-ME催化NADP+還原成NADPH,在340nm下測(cè)定NADPH增加速率。

    需自備的儀器和用品:

    紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
    樣品中AA提取:

    1.按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行室溫勻漿,然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來(lái)水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測(cè)。

    2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

    3.血清等液體:直接檢測(cè)。

    計(jì)算公式如下:

    1、血清(漿)LAP活力的計(jì)算:

    單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

    LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

    2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:

    1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

    單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

    LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

    2)按樣本鮮重計(jì)算:

    單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

    LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

    3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

    單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。

    LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

    V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),2000萬(wàn)。

    注意事項(xiàng):

    1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。

    2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如果測(cè)定的吸光值過(guò)高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。

    3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無(wú)吸收峰,因此,570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

    4.檢出限為100μmol/L。

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    NAD蘋(píng)果酸酶(NADME)測(cè)試盒土壤蔗糖酶(S-SC)測(cè)試盒/微量法100管/48樣

    土壤脂肪酶(S-LPS)測(cè)試盒/分光光度法50管/48樣

    土壤脂肪酶(S-LPS)測(cè)試盒/微量法100T/96S

    土壤植酶測(cè)試盒/分光光度法50T/24S

    土壤植酶測(cè)試盒/微量法100T/48S

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    土壤中性(S-NPT)測(cè)試盒/微量法100管/48樣

    土壤中性磷酶(S-NP)測(cè)試盒/分光光度法50管/48樣

    土壤中性磷酶(S-NP)測(cè)試盒/微量法100T/96S


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