研生試劑-基因槍的基本原理及影響因素
人類早就夢想能夠突破物種界限，按照人的意愿培育或改良動植物新品種。20世紀70年代，DNA重組技術的出現(xiàn)為人類愿望的實現(xiàn)提供了可能。在獲得符合要求的基因之后，面臨的是如何將基因?qū)怂x擇的細胞中，并使之穩(wěn)定表達，出現(xiàn)所期望的遺傳性狀。其中，基因?qū)耸顷P鍵的環(huán)節(jié)之一。隨著動植物基因工程研究的相繼開展，先后出現(xiàn)了化學介導、生物介導和物理介導等類型方法。在物理介導法中，有激光打孔、電擊孔和基因槍等方法。
基因槍法，又稱生物彈法或微粒槍法、微粒轟擊法，是依賴高速度的金屬顆粒將外源基因引入活體細胞的一種轉(zhuǎn)化技術。它是繼農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化法之后又一應用廣泛的遺傳轉(zhuǎn)化技術。這種方法操作簡單，效率高，適應性強。一次可以向數(shù)以千計的細胞導人基因，不受細胞、組織或器官的類型限制，此外其目標命中率高，因此格外受重視。基因槍根據(jù)其加速裝置可分為式、電動式和氣動式。
一、基本原理
經(jīng)適當處理后，使DNA液均勻地吸附在或包裹于微小的鎢粉或金粉顆粒表面，利用基因槍的爆炸、高壓放電或高壓氣體作驅(qū)動力，發(fā)射出微彈與DNA的復合體，擊中并高速穿透真空室中受體細胞的細胞壁及細胞膜，進入細胞內(nèi)，從而達到將吸附于微彈上的外源DNA導人細胞或原生質(zhì)體，獲得整合與表達的目的。微彈復合體對受體細孢造成的損傷可以修復。
二、影響因素
1)不同濃度的CaClz對基因瞬時表達和穩(wěn)定表達的影響。
2)添加亞精胺溶液與未加亞精胺的轟擊對基因瞬間表達影響不大。
3)太高的氦氣壓力會對細胞造成不可逆的損傷。
4)轟擊次數(shù)對愈傷組織轉(zhuǎn)化的影響很小。
5)細胞處于不同的生理狀態(tài)，初生愈傷組織細胞的結構緊密，細胞核大，質(zhì)濃，而繼代3個月后的愈傷組織逐漸老化，細胞液泡化程度高。
6)在基因槍轉(zhuǎn)化前24h分別用5、10、20Gy丁射線輻照處理愈傷組織。5Gy處理的基因瞬時表達明顯增強，抗性愈傷比例比對照提高近l倍。
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