ELISA常見(jiàn)問(wèn)題和處理
1、無(wú)顏色 試劑孵育的時(shí)間沒(méi)有按說(shuō)明書操作。 確定生物素化抗體，連接的HRP試劑或鏈霉親和素-HRP使用的時(shí)間是否適當(dāng)。
2、不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑混用。 重新檢查試劑的標(biāo)簽，確準(zhǔn)所有組分都屬于正使用的試劑盒中的。不能混用不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑。
3、漏加酶 檢查操作流程，注意不要漏加
4、HRP酶污染了疊氮鈉 使用新配制的試劑，禁含疊氮鈉 標(biāo)準(zhǔn)品有問(wèn)題(若在標(biāo)本孔中有信號(hào)) 按說(shuō)明書檢查標(biāo)準(zhǔn)品的制備使用1瓶新標(biāo)準(zhǔn)品
某一容器未洗凈,殘留滅活酶物質(zhì)
盡可能用試劑盒內(nèi)容器,另覓一定要潔凈、可靠使用含血清的緩沖液配制/復(fù)溶抗體 重新確認(rèn)所選用的試劑 .
漏加顯色劑A或B
加顯色劑后觀察一下液面高度
試劑配制/使用有誤
將實(shí)驗(yàn)重做；嚴(yán)格按說(shuō)明書操作，每次配制和使用前看清標(biāo)簽。
緩沖液污染
配制新新鮮的緩沖液
顯色弱
超過(guò)有效期的產(chǎn)品可能會(huì)產(chǎn)生很弱的信號(hào)。
檢查產(chǎn)品的有效期
加入試劑的體積和時(shí)間有誤
確定所使用的每一個(gè)試劑的體積正確的和加入的時(shí)間是適當(dāng)?shù)摹?
試劑、樣品用前未能平衡 用前試劑、樣品置室溫平衡10分鐘左右
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